卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系
卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系 【关键词】 原发性肝癌 卵圆细胞 物学特征 肝癌发生 卵圆细胞最初是在1944年由opie等[1]在大鼠化学诱癌的过程中发现的。1956年，farber[2]首次将其命名为卵圆细胞。关于肝癌的发生，主要有两种不同 的学说：一种认为肝癌是由分化成熟的肝细胞去分化而成，这是关于肝癌发生的 比较经典的理论[3]；
另一种学说认为肝癌是由肝内的干细胞——卵圆细胞异常 分化所致；
其代表人物sell s等[4]根据卵圆细胞的形态、表型特征、癌基因表达 等大量间接证据，认为肝细胞癌来源于卵圆细胞。由于卵圆细胞是一个异质性的 细胞群，对其生物学特性还没有一个公认的结论，这样就导致分离、提纯卵圆细 胞还缺乏一个公认的标准。卵圆细胞的可能来源、卵圆细胞与肝癌发生之间的关 系等依然是学术界争论的问题。正是基于以上存在的问题，我们设计了本实验， 试图通过动态的方法观察卵圆细胞的生物学特征及其可能的来源，并为肝癌发生 的干细胞异常分化学说提供一个实验依据。
1 材料与方法 1.1 动物模型的构建及标本处理 选取的sd雄性大鼠和标准饲料由中山大学北校区实验动物中心提供，诱癌 饲料由标准饲料加入0.06％3′ 甲基 4 二甲氨基偶氮苯 （3′ methyl 4 dimethylaminoazobenzene, 3′ me dab）(东京化成工业株式会 社)制成。Www.133229.CoM29只sd大鼠分为2个实验组：诱癌组大鼠24只，喂饲 诱癌饲料和正常饮水；
对照组大鼠5只则喂饲标准饲料和正常饮水。各组大鼠分 别在诱癌后第4、8、14、17和24周处死（诱癌组第4周时处死4只，其后分4次各 处死5只；
对照组每次处死1只），取肝组织经4％甲醛固定，石蜡包埋并连续切 片备用。
1.2 常规he染色和免疫组化(immunohistochemistry,ihc) he染色按照实验室常规方法进行。
1.2.1 免疫组化所选用的一抗、试剂盒及操作方法。
ov 6单抗，由美国stewart sell教授惠赠。抗体稀释度为1∶50，用edta高 压修复，所用二步法试剂盒及dab显色剂均购自福州迈新公司。afp（克隆号a0008）和c kit（克隆号a4502）均购自dako公司，前者抗体稀释度为1∶100，用柠檬酸 热修复；
后者抗体稀释度为1∶50，用edta高压修复；
所用sp法试剂盒及dab显色 剂均购自福州迈新公司。上述3种免疫组化均按照说明书进行操作。
1.2.2 免疫组化对照组的选择 每组切片均设立阴性空白对照、阳性对照、阴性对照。阴性空白对照片用 pbs代替一抗，其余方法步骤一样；
阳性对照片是已知的肯定有表达的切片；
阴 性对照片是肯定没有表达的切片。
1.3 特殊染色