梗阻性黄疸胆汁中胆管脱落细胞研究
梗阻性黄疸胆汁中胆管脱落细胞研究 毕业论文 作者：蔡磊 曲强 何小东 周立 张晋夏 【关键词】 胆管脱落细胞；胆管癌；
胆管结石；
梗阻性黄疸 【Key words】 Biliary cells;
Cholangiocarcinoma;
Cholangiolithiasis;
Obstructive jaundice 梗阻性黄疸在外科临床上常见。胆管结石和胆管癌是导致梗阻性黄疸的主 要病因。经胆汁引流进行胆管脱落细胞的细胞学检查，是近年来逐渐开展的诊断 技术。多种非手术获取细胞方法已被应用，如经PTCD、ERCP引流胆汁或同时采 用细胞刷取、组织钳夹等技术［1］。但是，受胆汁引流量较少或操作技术限制， 目前对病理状态下胆管脱落细胞数量和形态缺乏整体认识， 细胞学诊断鉴别良 恶性病变敏感性和稳定性较差。本研究在改进胆汁收集方法基础上， 比较胆管 结石和胆管癌胆汁中脱落细胞特征，为进1步认识胆管病变过程中胆管上皮细胞 形态，在细胞和分子生物学水平研究胆管恶性肿瘤发生提供新思路。
1 材料与方法 1.1 1般资料 1.3 胆管脱落细胞的染色和观察 重悬细胞至1 ml PBS平衡液中，移至加有载玻片和滤纸的细胞沉淀仪内， 4 ℃冰箱过夜，自然干燥，用4 ℃丙酮固定细胞10 min。瑞 姬双染法进行染色：
细胞固定好后加入瑞 姬双染料混合物A液(Baso公司)3滴，染色3 min，再加染 料缓冲液B液6滴，充分混匀后，染色3 min，自来水冲洗玻片1 min，干燥后封片。
涂片及染色后细胞在Nikon Eclips 80显微镜下观察，经Nikon CCD(DS 5M U1) 采集系统收集记录。
1.4 统计学分析 胆管癌和胆管结石胆汁中脱落细胞离心后分别计数，两组细胞数以±s表示， 组间均数比较采用ANOVA方法(SPSS 11.0软件处理)。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 瑞 姬双染法染色显示胆管癌胆汁中脱落细胞呈嗜碱性，体积大，成团聚 集，视野中可见大量异形细胞。核质比失调，细胞核呈浓染，核质染色不均伴有 核内空泡形成，核仁肥大且数量多少不等，核膜增厚明显，具有癌细胞特征(图 1C)。胆管结石胆汁中脱落细胞体积较小，染色呈嗜酸性，核质比正常，细胞核 着色均1，未见异常分裂象，与胆管癌的脱落细胞形态结构明显不同(图1D)。
3 讨论 胆管癌是起源于胆管上皮的恶性肿瘤，确诊时多为晚期，手术切除率低， 预后差。目前胆管癌的病因尚未明确，已经发现的胆管癌致病危险因素包括原发 性硬化性胆管炎、肝血吸虫病、先天性胆管囊肿、肝内胆管结石、胆管损伤和丙 型肝炎等。
Yeh等［2］发现胆管腔内胆管癌的形成可能经历下列阶段，即肝内 胆管结石、胆管上皮细胞不典型增生和原位或微小浸润癌。因此，胆管结石或慢 性炎症所导致的胆管上皮不典型增生可能是胆管癌的癌前病变。但是，由于胆管 在体内的解剖位置特殊，目前研究多取自手术切除标本。如能在术前获取胆管上 皮细胞，不但有助于胆管疾病的诊断和鉴别，更对胆管恶性肿瘤发生、发展的动 态检测，以及在细胞和分子生物学水平上深入认识胆管癌病因具有重要意义。
近年来的蛋白和基因表达研究显示，部分生理情况下不表达或极少表达于 胆管上皮的基因和相应蛋白，如黏蛋白、3叶肽和同源异型框蛋白等，在结石、 胆管异形性上皮细胞乃至胆管癌时有异常表达［5-8］。这提示胆管结石及胆管 上皮长期炎症具有癌变倾向或在1定程度上需与癌前病变相鉴别。本研究建立的 有效收集胆管脱落细胞的方法，1方面可以成为胆管癌早期诊断的依据，同时也 是在细胞和分子生物学水平探讨胆管癌发生机制的途径。