肿痛安胶囊中各药材提取物的体外抗菌活性探析
肿痛安胶囊中各药材提取物的体外抗菌活性探析 肿痛安是华佗始创明方玉真散，现有的胶囊剂是在原方的基础上通过 重新组方而成，其中的主要成分有白附子(制)、防风、羌活、三七、天麻、僵蚕、 天南星(制)、白芷。肿痛安胶囊口服后具有祛风化痰、行瘀散结和消肿定痛的作 用，临床主要用于风痰瘀阻引起的牙痛、咽喉肿痛、口腔溃疡，及风痰瘀血阻络 引起的痹病，症见关节肿胀疼痛、筋脉拘挛、屈伸不利，另外，在口腔及耳鼻喉 疾病和破伤风的辅助治疗等疾病的治疗上，肿痛安胶囊也取得了显着的较好的疗 效。相关研究显示，肿痛安组方中僵蚕、羌活对金葡菌、大肠杆菌、绿脓 杆菌均有抑制作用[1，2];白附子、防风对葡萄球菌和链球菌也表现出抗菌活性。
为考察肿痛安的体外抗菌作用，本文就肿痛安提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡 萄球菌的体外抗菌活性进行了研究，以期为临床应用提供参考和依据。目前肿痛 安胶囊以药材全粉入药，因此，考察肿痛安胶囊中各药材的提取物的体外抗菌活 性，对揭示该产品的作用机理以及新剂型开发具有一定意义。
1仪器与材料 1.1仪器与设备多点接种仪:A400，英国苏赛克斯。生物安全 柜:HFsafe-1500，力康发展有限公司。生化培养箱:LRH-250A-Ⅱ，韶关市泰宏医 疗器械有限公司。立式灭菌器:LMQ.J，山东新华医疗器械股份有限公司。
1.2材料 1.2.1肿痛安胶囊提取物:河北奥星集团药业有限公司提供，每毫升含 生药1g，批号:20130501、20130502。
1.2.2培养基:M-H肉汤，批号:20110725;M-H琼脂，批号:20110301，北 京双旋微生物培养基制品厂。
1.2.3受试菌:临床分离致病菌，共计165株，分别为MSSA51株、 MRSA50株、MSSE33株、MRSE31株，河北省某三甲医院提供。
1.2.4阳性对照药:万古霉素，批号为037K0686，Sigma公司。
1.2.5质控菌:金黄色葡萄球菌ATCC29213，中国食品药品检定研究院。1.3方法 1.3.1肿痛安胶囊水提物的制备:取三七、天麻、僵蚕、白附子(制)、防 风、羌活、天南星(制)、白芷八味药材净选后粉碎，过60目筛。取上述药粉100g， 用15倍量的水超声1h后浸泡12h，过滤，上清液于50℃减压浓缩至每毫升相当于 1g药材，将棕黑色浓缩液灌装于10ml安瓿瓶中并于121℃30min灭菌。
1.3.2肿痛安提取物的最低抑菌浓度确定:采用琼脂二倍稀释法测定肿 痛安提取物对受试菌的最低抑菌浓度(MIC)。①将培养16～18h的受试菌和质控菌 调整至0.5麦氏单位浊度后再做10倍稀释。②转接至接种盘内，用多点接种仪将 菌液接种到含肿痛安提取物分别为50、25、12.5、6.25、3.12、1.56mg/ml的M-H 培养基上，同时将菌液接种到含有万古霉素为4、2、1、0.5、0.25μg/ml的M-H培 养基上，接菌量约为104CFU/点。在33～35℃条件下培养16～18h，以能够完全 抑制细菌生长的肿痛安提取物的最低浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
2结果 万古霉素对质控菌ATCC29213的MIC为1～2μg/ml，均在CISL规定的 质控范围[5]内，实验系统成立。批号为20130501、20130502的肿痛安提取物对 质控菌和123株临床分离菌的MIC测定结果。
3讨论 中草药在体外对多种病原微生物具有抑制或杀灭作用[6]，早在20世 纪30至40年代，我国就开始进行中药体外抗菌作用的研究，并证明了一大批中药 对各种细菌有抗菌作用[7]。羌活水煎剂对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑 制作用[8]，羌活油对金黄色葡萄球菌、痢疾、大肠、绿脓杆菌有明显抑制作用[2]， 羌活中的发卡二醇，具有显着的抗金葡菌的活性[9]。白芷与当归水煎提取物， 对金葡菌和大肠杆菌具有杀菌作用[10]。防风水煎剂对金葡菌、乙型溶血性链球 菌、肺炎双球菌及产黄青霉菌、杂色曲菌均有抑制作用[4]。白附子对表皮葡萄 球菌、克雷伯氏菌、化脓链球菌、停乳链球菌、化脓棒状杆菌、无乳链球菌等敏 感[3]。僵蚕对金葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌有轻度抑制作用[1]。肿痛安配方中 含有上述中药，肿痛安提取物表现出的抗菌活性，与这些组份具有的抗菌作用不 无关系。金葡菌和表葡菌均是医院感染中最常见的致病菌，研究发现，MRSA、 MRSE对很多抗生素耐药[11，12]，这给临床治疗带来很大困难。从实验结果看， 肿痛安提取物对MRSA、MRSE具有很好的抗菌作用，其作用机制有待进一步的探讨。
在临床上，肿痛安对口腔溃疡、牙周炎、急、慢性咽炎、痰血瘀滞型 膝骨关节炎等具有很好的疗效[13-16]，总有效率都在89%以上，在治疗急慢性咽 炎上，总有效率高于阿莫西林[15]。肿痛安胶囊是纯中药制剂，方中制白附子、 天南星为君药，天麻、僵蚕为臣药，防风、羌活、白芷为佐药，三七为使药。白 附子能解毒、散结、消肿止痛;天麻能祛风湿、止痹痛;天南星能燥湿化痰、祛风 止痉、散结止痛;僵蚕能散风清热、泻火燥湿;防风、羌活、白芷能清热散风、导 邪外出;三七有通络消肿、止痛的功效。肿痛安临床上不俗的表现，除了其具有 的抗菌活性外，可能还因其调动了机体的免疫防御功能而发挥扶正祛邪的作用。
本试验研究结果表明，两个批次的肿痛安提取物，对受试菌的临床分 离菌的MICrange为12.5mg/ml～50mg/ml，多数菌株的MIC在12.5mg/ml～25mg/ml 范围内，MIC50均在12.5～25mg/ml，MIC90多在25～50mg/ml，显示两个批次的 肿痛安提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有较好的体外抗菌活性。
综上所述，肿痛安胶囊水提物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有 较好的体外抗菌作用，这为进一步研究和优化提取工艺、开发新剂型、扩大临床 应用范围提供了参考。